干货收藏！干细胞代次如何选？看懂这篇不踩坑~

“这次给我用的干细胞有多少亿？是不是越多越好？”

在干细胞治疗咨询里，“细胞数量” 几乎是所有人的第一关注点 —— 很多人认为 “数量越多，效果越好”，却鲜少有人追问 “这些干细胞是第几代？”

有人花高价买了 “上亿原代细胞”，却不知道原代细胞不可能应用，但凡鼓吹、必定骗人；有人图便宜选 “高代次多数量” 的干细胞，却没意识到过度传代的细胞早已开始衰老、失去核心功能。

其实，干细胞的数量只是 “基础项”，代次才是决定治疗效果和安全性的 “关键项” —— 它像干细胞的 “成长履历”，记录着细胞在体外培养中的 “健康状态”，选对代次，比盲目追求数量更重要。

那么，第几代的干细胞才最好呢？

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，广泛存在于人体的各种组织中，对维持组织和器官的生长发育及修复具有重要作用。在体外培养过程中，干细胞会经历不断的分裂和扩增，这一过程被称为传代。

当然，代次只是选择干细胞的 “参考项” 之一，细胞的活性、纯度、培养环境（是否符合 GMP 标准）等，同样是影响效果的核心因素。避开 “唯代次论” 的误区，综合评估才是关键。

中国组织化学与细胞化学杂志的研究文献《不同代次人脐带间充质干细胞生物学特性评估》通过研究P3、P5、P10三个代次的hUC-MSCs，给出了研究结论：

P3、P5、P10三个代次的hUC-MSCs均贴壁生长，细胞形态为长而扁平的梭形细胞，无明显差异。P3 和P5的HUC-MSCs大小较为均一，而 P10的个别细胞胞体有所增大。

3个代次HUC-MSCs均高表达 CD73、CD90 及 CD105（阳性 率 ≥95%），不表达或低表达CD11b、CD19、CD34、CD45及HLA-DR（阳性率 ≤2%），均符合间充质干细胞的鉴定标准。

3个代次的hUCMSCs均为正常双倍体核型 (46, XY/46，XX)，未发现染色体的缺失、重复、倒位、异位、增多等结构畸形改变。

3个代次的HUC-MSCs均出现红色的钙质结节和红色的脂滴，且无明显差异。

3个代次的hUC-MSCs生长曲线相似：第1 ～ 2天细胞处于潜伏期，增殖不明显；第 3 ～ 5 天细胞进入对数生长期；第6天之后进入平台期，细胞生长停滞。细胞增殖曲线均呈“S”型，两两比较，细胞的增殖能力随着扩增代次的增加而降低，P3代细胞的增殖能力更强一些。

衰老相关的 β- 半乳糖苷酶 (SA-β-gal) 染色是目前检测细胞衰老最常用的方法。本研究结果显示，P3、 P5HUC-MSCs内可见少量 β- 半乳糖苷酶染色的衰老细胞，P3 与 P5 之间衰老细胞数无显著性差异；与 P3、P5HUC-MSCs比较，P10 HUC-MSCs中衰老细胞数量显著增加，即随着扩增代次的增加，HUCMSCs逐渐衰老，表现为胞体增大，胞核体积异常及多核，胞内颗粒增多，并出现高酶活性的 SA-β-gal。

SASP是指衰老相关分泌表型，常见的SASP因子有IL-6、IL-1β、IL-13、TNFα、G-CSF和GM-CSF。SASP因子可通过细胞自分泌加快衰老进程，也可通过细胞旁分泌促进衰老。细胞因子的液相芯片检测显示，3个代次的HUC-MSCs 胞内及其培养上清均能检出IL-6、IL-1β、TNF-α、GCSF和GM-CSF。IL-6 和IL1β在胞内的表达水平随着扩增代次的增加显著升高。由此可见，随着干细胞代次的增加，分泌的衰老相关细胞因子量也会增加，从而诱发机体的衰老。